SPE固相萃取小柱原理如下：
 

　　1.選擇SPE固相萃取小柱或濾膜　首先應根據待測物的理化性質和樣品基質, 選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或濾膜的大小與規格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內樣品, 一般應選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
 

　　2.活化　萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5～ 10ml 溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水
 

　　溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易
 

　　被水潤濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前, 應使SPE 填料保持濕潤, 如果填料干燥會降低樣品保固相萃取技術方法固相萃取技術方法留值; 而各小柱的干燥程度不一, 則會影響回收率的重現性。
 

　　3.上樣　一般可采取以下措施:
 

　　(1) 用0.1mol/L酸或堿調節,使pH<3或pH>9,離心取上層液萃取；
 

　　(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液,以水或緩沖液稀釋后萃取；
 

　　(3) 用酸或無機鹽沉淀蛋白質后取上清液,調節pH 值后萃取；
 

　　(4) 超聲15min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高,加樣前先用水或緩沖液稀釋,必要時可用酸、堿水解反應破壞藥物與蛋白質的結合,然后萃取。流速應控制為1ml/min,流速快不利于待測物與固定相結合。
 

　　4.淋洗　反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積,而SPE濾膜為5～10ml。
 

　　5.洗脫待測物　應選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離,可調節pH 值,抑制樣品離子化,以增強待測物在反相SPE 填料中的保留,洗脫時調節pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫,收集洗脫液后再調節pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果。在洗脫過程中應減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。